RiboLockTM RNase Inhibitor

RiboLockTM RNase Inhibitor

逆转录酶优化反应温度反应最高温度通读长度RNase H 活性失活Units/20 ul
总RNA用量/20 ul
MaximaTM Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb+85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase42-45°C55°C13 kb– 70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
RevertAidTM Reverse Transcriptase 42°C50°C13 kb+70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
M-MuLV Reverse Transcriptase37°C37°C9 kb+70°C, 10 min40 u100 ng - 5 ug
AMV Reverse Transcriptase45-50°C60°C13 kb++85°C, 5 min10 u10 ng - 5 ug
 
  • 热失活75°C, 10 min - 热失活75°C, 10 min
  • 重组酶 - 重组酶
  • LO合格 - LO合格
Catalog#Size, concentrationCertificate of AnalysisPrice
EO0381 2500 u (40 u/ul) EO0381  ¥200
EO0382 4 x 2500 u (40 u/ul) EO0382  ¥1000
EO0387 400 u (40 u/ul) EO0387 ¥120
Product information
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References
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Features

  • 应用范围广,适合多种使用条件。
  • 保护RNA,使其免受降解。最高有效温度达55°C。
Applications

  • 抑制RNA降解,应用如下:
    一 体外转录(1);
    一 cDNA合成(2);
    一 体外翻译(3);
    一 分离含有mRNA-蛋白复合物的哺乳动物细胞组分(3);
    一 RNA扩增(4)。
  • RNA纯化和保存。
  • 分离和鉴定特殊的核酸酶活性(5)。
  • 肿瘤抑制研究(6)。
说明
RibolockTM RNase Inhibitor按1:1比例非竞争性与RNases A(见图1)、B和C结合,从而抑制RNases A、B和C的活性。但是其不能抑制真核生物RNases T1、T2、U1、U2、CL3和原核生物RNases I和H的活性。

来源
大肠杆菌菌株,含有编码哺乳动物核酸酶抑制剂的克隆基因。

分子量
49.6 kDa,单体。

活性单位定义
1个活性单位是指50%抑制5?ng RNase A活性所需RibolockTM RNase Inhibitor用量。

抑制剂活性分析混合物:100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.2 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNase A, 0.1 mg/ml [3H]-RNA, 50 mg/ml酵母RNA, 8 mM DTT。


保存缓冲液
保存缓冲液组分:
20 mM HEPES-NaOH (pH 7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT变性剂和50% (v/v)甘油。

质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、磷酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试方法为RNA和cDNA的合成。

抑制与失活
  • 抑制剂:常用变性剂(SDS、尿素)和所有氧化剂(对-氯汞基苯甲酸盐、溶解氧、高氧化状态的离子)可强烈抑制RiboLockTM RNase Inhibitor并释放被结合的RNase。
  • 失活:75°C加热10分钟;70°C加热10 分钟仍然可检测到活性残留。

备注
  • 保存缓冲液中的DTT可确保RibolockTM RNase Inhibitor长期保存的稳定性,其并非抑制剂活性发挥的必需品。
  • 推荐浓度 – 1 unit/μl/μlμl反应体系。


RibolockTM RNase Inhibitor对RNase A的抑制效果分析。
图1。RibolockTM RNase Inhibitor对RNase A的抑制效果分析。
37°C时,人RNA (1?μg)中添加20 u RibolockTM RNase Inhibitor和不同量的RNase A(不含DNase和蛋白酶,#EN0531)。
M – RiboRulerTM High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA,含RNase A
1-4 – 人总RNA,含RiboLockTM Ribonuclease Inhibitor和RNase A
RibolockTM RNase Inhibitor热稳定性。
图2。RibolockTM RNase Inhibitor热稳定性。
人的总RNA (1?μg)中添加20 u RibolockTM RNase Inhibitor和50 pg RNase A(不含DNase和蛋白酶,#EN0531),不同温度条件下孵育。
M – RiboRulerTM High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA,含RNase A
1-5 – 人总RNA,含RiboLockTM Ribonuclease Inhibitor和RNase A
(完)

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