RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit

逆转录酶优化反应温度反应最高温度通读长度RNase H 活性失活Units/20 ul
总RNA用量/20 ul
MaximaTM Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb+85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase42-45°C55°C13 kb– 70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
RevertAidTM Reverse Transcriptase 42°C50°C13 kb+70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
M-MuLV Reverse Transcriptase37°C37°C9 kb+70°C, 10 min40 u100 ng - 5 ug
AMV Reverse Transcriptase45-50°C60°C13 kb++85°C, 5 min10 u10 ng - 5 ug
 
  • -20°C保存 - -20°C保存
Catalog#Size, concentrationCertificate of Analysisprice
K1631 for 20 react. K1631  ¥700
K1632 for 100 react. K1632  ¥2800
Product information
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References
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Features

  • 全长的第一链cDNA 产量高,最长可合成13 kb的cDNA。
  • 增加的反应温度范围:42-55°C。
  • 配套提供RiboLockTM RNase Inhibitor。
  • 完全 一 试剂盒提供oligo(dT)18和随机六聚体引物。
Applications

  • 第一链cDNA合成,作为RT-PCR和实时RT-PCR模板(1, 2)。
  • 构建全长cDNA文库。
  • 制备杂交用探针。
  • aRNA合成。
说明
RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit 是一个完整的以RNA为模板高效合成第一链cDNA的反应体系。该试剂盒可合成长达13 kb的cDNA。

试剂盒使用RevertAidTM H MinReverse Transcriptase。该酶由于点突变而完全消除了RNase H活性。

因此,该酶不能降解第一链cDNA合成时形成的RNA-DNA复合体中的RNA。该酶在宽温度范围(42-55°C)保持活性,适合逆转录具有大量二级结构的RNA。试剂盒配套提供的重组RiboLockTM RNase Inhibitor 有效保护RNA模板免于降解。该产品与逆转录反应完全兼容,因为在55°C时仍然保持活性。

试剂盒配套提供oligo(dT)18和随机六聚体引物。oligo(dT)18与mRNA 的poly(A)尾选择性结合。随机六聚体引物转录无需poly(A) 尾,因此可转录mRNA的5’-端区域,也可以无poly(A)尾的RNA (micro RNAs)为模板合成cDNA。试剂盒也可使用基因特异性引物。

第一链cDNA可直接作为PCR (见RT-PCR操作说明书)、实时PCR或第二链cDNA合成(见操作说明书)的模板。


质量控制
功能测试:以多聚腺苷酸RNA转录子为模板合成第一链cDNA(分别测试特异性引物、oligo(dT)18和随机六聚体引物)。合成的cDNA作为后续PCR的模板。

组分
  • RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase
  • RiboLockTM RNase Inhibitor
  • 5X Reaction Buffer
  • dNTP Mix, 10 mM each
  • Oligo(dT)18 Primer
  • Random Hexamer Primer
  • Control GAPDH RNA
  • Forward GAPDH Primer, 10 uM (5'-CAAGGTCATCCATGACAACTTTG-3')
  • Reverse GAPDH Primer, 10 uM (5'-GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG-3')
  • DEPC-treated Water
  • 详细的操作手册


两步法RT-PCR:使用RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit 和Long PCR Enzyme Mix。
图1。两步法RT-PCR:使用RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit 和Long PCR Enzyme Mix。
RevertAidTM H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit 催化第一链cDNA 合成(模板:1 μg 小鼠心脏总RNA;引物:oligo(dT)18 )。合成的cDNA作为后续PCR扩增(Long PCR Enzyme Mix (#K0181))的模板。小鼠dystrophin基因mRNA 5’-end 特异性引物和一系列侧翼引物配合扩增目标基因的不同区域。
M1 – GeneRulerTM DNA Ladder Mix
1-6 – RT-PCR 产物
M2 – Lambda – pUC Mix Marker
(完)

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