Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPC

Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPC

逆转录酶优化反应温度反应最高温度通读长度RNase H 活性失活Units/20 ul
总RNA用量/20 ul
MaximaTM Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb+85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase42-45°C55°C13 kb– 70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
RevertAidTM Reverse Transcriptase 42°C50°C13 kb+70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
M-MuLV Reverse Transcriptase37°C37°C9 kb+70°C, 10 min40 u100 ng - 5 ug
AMV Reverse Transcriptase45-50°C60°C13 kb++85°C, 5 min10 u10 ng - 5 ug

逆转录

  • -20°C保存 - -20°C保存
Catalog#Size, concentrationCertificate of Analysisprice
K1641 for 50 react. K1641  ¥2500
K1642 for 200 react. K1642  ¥7500
Product information
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Features

  • 以宽范围(0.01 pg – 5 μg)的起始RNA量可重复性地合成cDNA 。
  • 提高了合成效率 – 15分钟内完成cDNA合成。
  • 提高了反应温度 – 可高达60°C。
  • 方便的设计 – 预混合溶液以方便在RT-qPCR 中的应用。
Applications

  • 两步 RT-qPCR。
说明
Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit是一个适用于两步实时定量PCR(RT-qPCR)的优化了cDNA合成的方便体系。该试剂盒采用了Maxima(R) Reverse Transcriptase,这是一个从M-MuLV RT进化衍生出的高效逆转录酶。该酶具有高热稳定性,耐用性及提高的的合成率。Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit能以宽范围(1 pg to 5 ug)的初始RNA量在提高的温度下(50-60°C)可重复性地合成cDNA。合成反应能在15-30分钟内完成。

Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit的组分对于RT-qPCR的使用者来说非常方便。试剂盒的成分是预混合好的以节省时间和降低可能的移液错误。试剂盒组分包括Maxima(R) Enzyme Mix, 5X Reaction Mix, 水(不含核酸酶)。

Maxima(R) Enzyme Mix 包含Maxima(R)逆转录酶和RiboLockTM核糖核酸酶抑制剂。重组的RiboLockTM抑制剂有效地保护RNA模板在温度高至55°C的范围内不被RNases A、B 和 C降解。

5X Reaction Mix 包含了余下的反应组分:反应缓冲液,dNTPs, oligo (dT)18和随机引物六聚体。

Water, nuclease-free 适用于反应体系的搭建和样品RNA 的稀释。它已经通过测试不含有核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶。


质量控制
已在在两步RT-qPCR中进行了功能测试,即以不同起始量(5 ng-0.5 fg)的 RNA为转录物逆转录反应及随后的采用Maxima(R) SYBR Green/ROX qPCR Master Mix的扩增反应。效率在90-110%的范围内,斜率在-3.09 和 -3.58之间,相关系数>0.99。

组分
  • Maxima(R) Enzyme Mix
  • 5X Reaction Mix
  • Water, nuclease-free
  • 详细的使用说明


高灵敏度两步RT-qPCR
图1。高灵敏度两步RT-qPCR。
A – 扩增图。
B – 标准曲线。
基于Jurkat 细胞不同量的总RNA (5 μg, 2.5 μg, 1 μg, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg)的人PPP1CA 基因的扩增。通过Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR (#K1641)合成第一链cDNA。采用针对PPP1CA的TaqMan(R) 分析和Maxima(R) Probe /ROX qPCR Master Mix (2X) 扩增第一链cDNA。反应在ABI 7500 Real-Time PCR 仪器上操作进行。1 pg 的总RNA被成功检测出。反应效率是105%,斜率为3.29,R2=0.999。
采用Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR得到的可重复性的RT-qPCR 结果.
图2。采用Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR得到的可重复性的RT-qPCR 结果. 。
第一链的cDNA由100 ng-1 pg 的 Jurkat细胞总RNA 和Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit和从16个复制反应中合成得到。合成出的cDNA在随后的在ABI 7500 实时PCR仪上进行的qPCR 反应作为模板应用。平行的逆转录酶反应显示出以宽范围RNA 起始量合成cDNA的可重复性和低变化性(<1% SD/Cq)。
Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的高产量和高灵敏度
图3。Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的高产量和高灵敏度。
E.coli 23SRNA基因的扩增基于10倍梯度稀释的总RNA (30 ng to 3 fg)。第一链的cDNA 的产生采用了Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR(红色) 以及来自其他供应商逆转录试剂盒(蓝色)。cDNA的扩增采用Maxima(R) SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (#K0221/2/3)在ABI 7500 实时PCR仪上进行。在采用了Maxima(R) First Strand cDNA Synthesis Kit的反应,全部的起始RNA量(30 ng – 3 fg) 以较低的Cq 和102% 的反应效率成功地检测出。对照试剂盒没有检测出最低的3 fg 稀释度的RNA且qPCR产物的产率也相对较低。
(完)

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