RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase

RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase

逆转录酶优化反应温度反应最高温度通读长度RNase H 活性失活Units/20 ul
总RNA用量/20 ul
MaximaTM Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb+85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase42-45°C55°C13 kb– 70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
RevertAidTM Reverse Transcriptase 42°C50°C13 kb+70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
M-MuLV Reverse Transcriptase37°C37°C9 kb+70°C, 10 min40 u100 ng - 5 ug
AMV Reverse Transcriptase45-50°C60°C13 kb++85°C, 5 min10 u10 ng - 5 ug
 
  • 热失活70°C, 10 min - 热失活70°C, 10 min
  • 重组酶 - 重组酶
  • LO合格 - LO合格
  • -20°C保存 - -20°C保存
Catalog#Size, concentrationSupplied with:Certificate of Analysisprice
5X Reaction Buffer
EP0451 10,000 u (200 u/ul)
(for 50 reactions of 20 ul)
1.00 ml EP0451  ¥1080
EP0452 5 x 10,000 u (200 u/ul)
(for 250 reactions of 20 ul)
5 x 1.00 ml EP0452  ¥4320
EP0457 2000 u (200 u/ul) 1.00 ml EP0457 ¥300
Product information
Protocols & recommendations
References
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Features

  • 高产量制备全长的第一链cDNA,最长可达13 kb。
  • 42-45°C范围具有最佳活性。
  • 温度高达55°C时仍有活性。
  • 合成掺入修饰核苷酸,如Cy3-、Cy5-、罗丹明-、氨基-、荧光-标记的核苷酸。
Applications

  • 第一链cDNA合成,用于RT-PCR和实时RT-PCR (3, 4, 5)。
  • 可提高反应温度,降低二级结构对逆转录的影响。
  • 合成cDNA,用于克隆和表达研究。
  • 制备芯片用标记的cDNA探针(6)。
  • DNA标记(3)。
  • 引物延伸法分析RNA (3)。
说明
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase (RT)是一种遗传修饰的M-MuLV RT,其与M-MuLV RT的结构和催化特性不同。该酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性,但是却没有RNase H活性(该活性区域点突变)(1, 2)。该酶不能降解第一链cDNA合成时形成的RNA-DNA复合物中的RNA,因此可获得全长的cDNA。

RevertAidTM H Min Reverse Transcriptase在宽的温度范围(42-55°C)内有酶活性,因此适合逆转录具有较多二级结构的RNA分子。


来源
大肠杆菌细胞(含有突变的基因pol )。该基因编码小鼠白血病病毒逆转录酶。

分子量
76.1 kDa,单体。

活性单位定义
1个活性单位是指在37°C、10分钟内将1 nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 4 mM MgCl2, 10 mM燚TT, 50 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM爌olyA·oligo(dT)12-18


保存缓冲液
保存缓冲液组分:
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。

5X 反应缓冲液
250 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。

质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能测试:第一链cDNA合成和RT-PCR。

抑制与失活
  • 抑制剂:金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺(2)。
  • 失活:70°C加热10分钟。
(完)

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