RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit

RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit

逆转录酶优化反应温度反应最高温度通读长度RNase H 活性失活Units/20 ul
总RNA用量/20 ul
MaximaTM Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb+85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase50-55°C60°C20 kb85°C, 5 min200 u0.01 ng - 5 ug
RevertAidTM H Minus Reverse Transcriptase42-45°C55°C13 kb– 70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
RevertAidTM Reverse Transcriptase 42°C50°C13 kb+70°C, 10 min200 u0.1 ng - 5 ug
M-MuLV Reverse Transcriptase37°C37°C9 kb+70°C, 10 min40 u100 ng - 5 ug
AMV Reverse Transcriptase45-50°C60°C13 kb++85°C, 5 min10 u10 ng - 5 ug
 
  • -20°C保存 - -20°C保存
Catalog#Size, concentrationCertificate of AnalysisPrice
K1651 for 20 react. K1651  ¥970
K1652 for 100 react. K1652  ¥3880
Product information
Protocols & recommendations
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Features

  • 高通量地制备长达20 kb的全长cDNA。
  • 在从45°C 到60°C 的宽温度范围内高效合成cDNA。
  • 提高的合成效率– 在30分钟内完成cDNA合成。
  • 高敏感度和特异性。
Applications

  • 第一链cDNA合成。
  • RT- PCR。
  • RT-qPCR。
  • cDNA文库构建。
  • 合成杂交探针。
  • RNA扩增。
说明
The RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit是一个高效合成第一链cDNA的完整体系.该试剂盒采用了RevertAidTM Premium Reverse Transcriptase (RT),这是一个从M-MuLV RT进化衍生出的高效逆转录酶。该酶是M-MuLV RT的衍生酶中具备最好的热稳定性的酶,并且没有RNase H活性。RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit可以在提升温度(可高至60°C)的情况下的合成长达20 kb的长cDNA,取代了其他体系合成全长cDNA的能力。由于提高了酶的第一链cDNA合成率,反应能在30分钟内完成。

RevertAidTM Premium Enzyme Mix 包含 RevertAidTM Premium逆转录酶 和 RiboLockTM RNase 抑制剂. RiboLockTM RNase抑制剂有效保护RNA模板在温度高至55°C的情况下不被RNases A, B and C降解。

Oligo(dT)18 and random hexamer primers 与试剂盒配套提供。随机六聚体引物的非特异结合性被用来从全部的总RNA群体中合成cDNA。oligo(dT)18引物有选择地退火到poly(A) RNA的3’端,仅从有poly (A) 尾的mRNA合成cDNA。基因特异性引物也可以配合这个试剂盒使用,以从特定的序列进行首要的合成。

Water, nuclease-free 被用来搭建反应体系和溶解样品DNA。这个水经相应的质量检测确定没有内切,外切脱氧核糖核酸酶,核糖核酸酶和磷酸酶的污染。


质量控制
已进行了功能测试,采用100 fg的对照GAPDH RNA 和GAPDH 对照引物,RT-PCR后经1%琼脂糖胶电泳,溴化乙锭染色后鉴定得到496 bp的明显产物。

组分
  • RevertAidTM Premium Enzyme Mix
  • 5X RT Buffer
  • dNTP Mix, 10 mM each
  • Oligo(dT)18 Primer
  • Random Hexamer Primer
  • Water, nuclease-free
  • 详细的使用说明


两步RT-PCR扩增长至20kb的目的片段.
图1。两步RT-PCR扩增长至20kb的目的片段. 。
1 ug Jurkat细胞总RNA (1 and 2)或小鼠骨骼肌总RNA (3 and 4)在采用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit逆转录反应中应用。合成的cDNA在后续的使用Long PCR Enzyme Mix (#K0181)及不同基因特定引物的PCR反应中用作模板:
3.9 kb – BCL2 (人 B-cell CLL/淋巴瘤2)
6.8 kb – POLE (人聚合酶)
13.3 kb – Dmd (小鼠 dystrophin蛋白)
20.2 kb – Neb (小鼠nebulin蛋白)
M – GeneRulerTM 1 kb Plus DNA Ladder (#SM1331)
在宽温度范围内有效合成cDN
图2。在宽温度范围内有效合成cDNA。
在从45°C 到 60°C的温度下,1 ug Jurkat细胞总RNA (1 and 2)在采用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit和Oligo(dT)18引物的逆转录反应中应用。不同长度的扩增子(0.5 kb, 3.9 kb, 6.8 kb 和 9.4 kb)在使用Long PCR Enzyme Mix (#K0181)的情况下,由温度高至60°C的范围内合成的 cDNA成功扩增出来。
采用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit在50°C 的高合成率
图3。采用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit在50°C 的高合成率。
采用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit 和其他的 第一链 cDNA 合成试剂盒在50°C 和5, 15, 30及 60分钟时以7.5 kb RNA转录物为模板合成。反应产物在1%的碱性琼脂糖凝胶上鉴定。RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit在5分钟内完成7.5 kb转录物的合成。
RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit在两步RT-PCR的更高的敏感度
图4。RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit在两步RT-PCR的更高的敏感度 。
Jurkat细胞总RNA (100 pg, 10 pg, 1 pg and 0.1pg)在50°C 时使用RevertAidTM Premium First Strand cDNA Synthesis Kit和42°C 时使用其他基于M-MuLV RT的试剂盒 ,逆转录反应以Oligo(dT)18为引物在20 ul体系中进行。PCR采用2 ul 的逆转录反应混合物,Maxima(R) Hot Start Taq DNA Polymerase (#EP0601) 和GAPDH 基因的特定引物。
(完)

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